Summary: Postquam laboratorium novam lineam cellularum obtinet, linea cellula primum exculta et amplificata est, deinde constringitur. Cryopreservatio cellularum primum ut tergum adhiberi potest cum cellae ob pollutiones alias condiciones amissae......
Postquam laboratorium novam lineam cellularum obtinet, linea cellula primum exculta et amplificata est, deinde constringitur. Cryopreservatio cellularum primum ut tergum adhiberi potest cum cellae ob pollutiones alias condiciones amissae sunt. Praeterea fere omnes cellulae in processu culturae et transitus quendam gradum variationis subeunt. Ad constantiam experimentalium eventuum conservandam, plerumque cellulae pro justo generationum excultae non possunt. Si iterum adhibeatur, opus est ad ungulam et ad culturam conservandam, cellulis minus passivis ante usum.
In cella congelatio processus praecipua quattuor sunt: cellula messis, usus agentium tutelarium, congelatio rate et ambitus repositionis.
Cellula messis
Cellulae ad cryopreservationem adhibitae plerumque selectae sunt cum cellae circiter 90% confluentes sunt. Hoc tempore, incrementum cellae bonum est et numerus cellularum magnus est, et medium culturae mutandum est ante 24 horas ante cellas messis. Modus colligendi cellulas cryopraeservationis eadem est ac consueta. Centrifugium ad 100xg per 5 minutas cellas colligendas easque resuspendendas. Cellulae vivae numerantur. Diminuere vel intendi ad duplum concentratio finalis cellae pro conservatione cellularum (plerumque 4-10 decies centena cellae/ml), aequam volumen adde culturae mediae agentis tutelae mixturae solutionem paratam, et leniter miscere, et aliquot ad fistulam cryopraeservationis; cryopreservation.
Usus agentium tutelae.
In cryopreservatione cellularum, DMSO vulgo pro agente tutelare adhibetur. In cryopreservatione cellularum, ultima intentio DMSO adhibitorum fere 5-15% est. Contentio DMSO in solutione cryopraeservationis cellulae specificae ex ATCC inveniri potest. Ad cellulas sensitivas praecipue, praesertim cellas hybridomas, melius est uti 95% serum et 5% DMSO in conservando. Cum agente tutela utens, culturae mediae vel serum adhibens ad unionem finalem bis ad componendum, et postea pari volumine suspensionis cellae culturae mediae commisce. Cellula frigore rate
Salvum congelatum cellularum optime regitur, ut tempus sufficiens ad cellulas dehydrandas sine nimia siccitate laedatur. Pro cellulis plerisque, gutta temperatura 1 ad 3°C per minutias convenit. Solet operatio cellulas -20°C per horas 1-2 ponere, easque in -80°C armario pernoctare (si leo -80°C non est, loco arido glacie uti potes), et deinde transferre ad liquidum piscinam nitrogenii vel infra -130 Repositionis diuturnae in armario ad ℃.
Repono environment
Diuturnum tempus cellularum repositionis temperamentum -130 vel inferior est. Temperatura iacuit gasi in piscina liquida nitrogenii est inter -140℃ et -180℃. Cellulae in strato gaseoso reponendae vel in nitrogen liquida immersae possunt. Si fieri potest, optimum est in strato gaseoso condere, quia liquorem nitrogenium vitare potest ne in torpore reponatur. Tubus explosionem facit cum cellae educuntur (sed hoc modo, tantum parva liquoris nitrogenis in piscina nitrogenis liquidae condi potest, quae frequenter addi debet). Cellulae etiam aliquot menses vel sic in armario ad -80℃ condi possunt.