1. Cellae cryopservandae debent esse in bono statu incrementi (inimici stipendii) ac rate superstitiosi, densitate circiter 80-90%.
2. Perscriptio num cellulae suas proprietates singulares ante congelationem adhuc retineant.
Exempli gratia, hybridoma probetur pro productione anticorporis una ad duos dies ante cryopreservationem.
3. Attende quale cryoprotectant.
DMSO gradus reagens sit, sterilis et hyalina (percolata cum 0.22 micron FGLP Telflon vel producta sterilia directe acquisita, ut Sigma D-2650), in parvis aliquot voluminibus 5-10 ml aliquotata, in tenebris 4 oC recondita. Noli multiplicare tempora. Glycerolum etiam esse debet de gradu tenui et post autoclaving in tenebris repositum. Utere intra unum annum post aperitionem, quia toxicum erit ad cellulas post longum tempus reposita.
4. Cell retrahitur pro cryopreservation:
(1) Fibroblast normal human: 1~3 x 106 cellulae/ml
(2) Hybridoma: 1~3 x 106 cellae/ml, coniunctio cellularum non nimis alta est, aliqua hybridoma post tabida 24 horas moritura propter altam intentionem congelatio.
(3) Tumor lineae inhaerens: 5~7 x 106, cellulae genere pendens. Adenocarcinoma altiorem attentionem post tabida requirit, dum HeLa solum 1-3 x 106 cellulis/ml indiget.
(4) aliae suspensiones: 5~10 x 106 cellae/ml, lymphocytae humanae esse debent saltem 5 x 106 cellulae/ml.
5. Concentratio cryoprotectant 5 vel 10% DMSO est. Si congelatio cellularum condiciones incertae sunt, cultura tergum utendum est dum ingluvie servatur ne torpore deficiat.
6. Mediolanum modum;
(1) Methodus Traditionalis: 4 oC 10 minuta ---> -20 oC 30 minuta ---> -80 oC 16-18 horas (vel pernoctare) ---> Tempus repono in vaporibus tempus liquidae piscinae NITROGENIUM .
(2) Programma refrigerandi: Utere machinae refrigerationis assiduae velocitatis ad redigendum ab cella temperie ad -1220 oC ad centesima -1 ~ -3 oC/min, et repone in Phase vaporis liquidi piscinae nitrogenii ad diuturnitatem. terminus repono. Idoneum est ad cellas suspensionis et hybridomas conservandas.
7. Materialis:
(I) Cellulae quae bene culta
(2) Fresh medium
(3) DMSO (Sigma D-2650)
(4) tube cryopreservation sterilis plastic (Nalgene 5000-0020)
(5) 0.4% w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061)
(6) Hemocytometer laminam vitream operculumque
(7) Cognitio velocitatis assiduae refrigerationis (KRYO 10 Series II)
8. Steps:
(1) Muta dimidium vel plenum medii moles uno die ante congelationem, et observa incrementum cellae.
(2) Praeparatio solutionis cryopraeservationis (praeparatio ante usum): Adde DMSO ad novum medium, ultima intentio 5-10% est, bene misce, et eam in cella temperiei postea usui pone.
(3) Secundum operationem subculturae cellae, excultas cellulas collige et parvam quantitatem suspensionis cellularum (circiter 0.1 ml) computare concentrationem cellulam et ratem salvos ante congelationem.
(4) Centrifuge, supernatantem tolle, congruam solutionem cryopreservationis adde ut cellulam retrahitur 1-5 x 106 cellas/ml, bene misce, et in tubum cryopreservationis intitulatum, 1 ml/phialam intitulatum, et parvum accipe. moles cellula suspensionis ad contagione deprehendatur.
(5) Cryopreservationis methodus 1: Cryotube ponitur ad 4 oC pro 10 minutis → -20 oC pro 30 minutis → -80 oC pro 16 ad 18 horas (vel pernoctare) → liquor lacus nitrogenii vaporum tempus ad longum tempus repositionis.
(6) Methodus repositionis glacians 2: Tubus glacians in assidua velocitate refrigerationis machinae cum programmate statuto ponitur, ac deinde in liquido NITROGENIO tank. ponitur.
英语
阿拉伯语
Ļ ļ